Plateau technique et expertises de l'UMR_S1140

Sur le plan expérimental, l’UMR_S1140 développe ses thématiques de recherche grâce aux compétences présentes dans l’unité. Il s’agit d’approches in vitro dans le domaine analytique (PAGE, Western blot, ELISA, culture cellulaire, cytométrie en flux, chromatographie basse et moyenne pression, étude de la relation structure-fonction, génotypage et séquençage…) et en collaboration avec les plates-formes spécialisées de la faculté de pharmacie, de l’université Paris Descartes, de l’Institut Cochin et du PARCC. Les études pré-cliniques sont réalisées dans l’animalerie locale.

Les techniques du labo en détail

Les expertises du labo

  • Biochimie : ELISA, SDS-PAGE, Western Blot, zymographie, acétate de cellulose…
    • Tests de coagulation : TP, APTT, anti-Xa, Temps de Génération de Thrombine, Thromboelastographie, Clot-waveform. Responsables Isabelle Gouin-Thibault et B. Le Bonniec.
    • Enzymologie : classique et semi-rapide, détermination de constantes d’inhibition et de constantes cinétique de deuxième ordre, simulation numérique. Responsable B. Le Bonniec.
    • Exploration fonctionnelle plaquettaire : L’unité dispose de 2 agrégomètres : un PAP8-8E (Bio-Data Corporation) et un Lumi-agrégomètre (Chrono-Log) qui, outre l’agrégation en PRP ou en plaquettes lavées (transmission optique), permet d’étudier l’agrégation en sang total (impédance) et de quantifier la sécrétion d’ATP lors de l’activation plaquettaire. Nous avons également développé une technique en microplaque permettant une analyse simultanée d’un grand nombre de point en utilisant des petits volumes de suspensions plaquettaires (PRP ou plaquettes lavées). L’étude de l’adhésion plaquettaire se fait en chambre de flux. L’unité dispose également de l’ensemble des techniques d’étude de la signalisation (Immunoblot-immunoempreinte, immunoprécipitation, pull-down, Elisa….). Responsable C. Bachelot-Loza.
    • Protéines recombinantes : mutagénèse dirigée, expression en cellules eucaryotes, caractérisation fonctionnelle. Responsables S. Gandrille et B. Le Bonniec.

    L’unité dispose des installations de la Plateforme Mutualisée de l’Institut du Médicament (P-MIM, Unité Mixte de Service CNRS UM3612 – Inserm US25) qui regroupent entre autre :

    • Une animalerie appartenant à la plateforme ANIMA5 (Pharm-Anima) de l’université Paris Descartes, qui comprend une animalerie A1 et A2 ainsi qu’un plateau d’imagerie du petit animal. L’animalerie héberge pour l’unité des modèles de souris comme précédemment citées ainsi que des modèles Crelox avec une invalidation conditionnelle, spécifique de tissu. La salle de chirurgie est équipée d’un poste d’anesthésie à l’isoflurane et d’un laser doppler qui permet de suivre la revascularisation du tissu ischémié au cours  du temps en fonction des traitements.
    • Un plateau d’Imagerie Cellulaire et Moléculaire équipé de 2 microscopes électroniques à transmission et à balayage, d’un microscope confocal à détection spectrale, ainsi que des installations permettant d’assurer le traitement complet de l’échantillon de la cage à l’objectif.
    • Une plateforme d’analyse cellulaire équipée d’un cytomètre en flux LSR Fortessa Becton Dickinson et d’un Bioplex 200TM (technologie Luminex). Ces deux appareils ne sont ouverts à la réservation qu’à des utilisateurs autonomes (formés par la responsable Coralie Guérin MCU Paris Descartes, UMR_S1140).
    • Le cytomètre en flux LSR Fortessa BD permet de détecter jusqu’à 16 couleurs et est contrôlé par le logiciel FACSDIVa (Becton Dickinson). Il est actuellement équipé de 4 lasers :
      • Laser bleu 488nm permettant la détection du FITC/alexa Fluor488/GFP/CFSE/Sytox green et PerCP/PerCP-Cy5.5
      • Laser vert-jaune 561nm permettant la détection du PE-Cy7/PE alexa 750, PE-Cy5.5/PE alexa 700, PE-Cy5/7AAD, PE-Texas red/PI/Alexa 568/Cy3/ECD/mCherry et DsRed/PE/dTomato.
      • Laser rouge 638nm permettant la détection du APC-Cy7/APC-H7/APC Alexa 750/APC-eFluor780, Alexa Fluor 700 et APC/Alexa 647/Cy5/Sytox red.
      • Laser violet 405nm permettant la détection du Qdot 655, Qdot 605, Qdot 585, Qdot 565, AmCyan/BD Horizon V500/Pacific orange et CFP/DAPI/Pacific Blue/Alexa 405/BD Horizon V450.
    • Le Bioplex 200 (Luminex ®) est conçu pour l’acquisition et l’analyse des tests de microdosages multiplex. Ce cytomètre de flux utilise la technologie xMAP de Luminex (Multi-Analyte Profiling) avec des microsphères de fluorescences différentes. Cette technologie d’array en suspension permet de quantifier simultanément jusqu’à 100 paramètres dans un même puits / échantillon. Possibilité de lire des plaques provenant de kits de différents fournisseurs (Biorad, Millipore, eBiosciences, Life Technology).